阿尔及利亚芸香酚含量及体外抗氧化、抗炎和抗菌活性评价 ...

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摘要

植物是多酚等天然抗氧化剂的宝贵来源，并具有许多新的的生物学功能。芸香属物种包括芸香属查勒彭斯长度和芸香长度，在阿尔及利亚是广布的种并且被用作治疗各种疾病的药用植物；然而，到目前为止，大多数进行的研究主要集中在分析生物碱和精油上。

本研究的目的是研究香茶菜地上部分的酚类物质芸香长度并评估其体外抗氧化、抗炎和抗菌性能。总多酚和黄酮类化合物用比色法测定，单个多酚用HPLC-DAD-ESI-MS鉴定和定量。抗氧化活性用DPPH和β-胡萝卜素试验评价，抗炎活性用抑制牛血清白蛋白变身和HRBC膜稳定法评价。

结果表明芸香提取物富含酚类化合物，总酚和类黄酮含量分别为41.63±0.394毫克GAE/格和13.97±0.33毫克当量/格。共鉴定出9种酚类化合物，包括3种酚酸和6种黄酮类化合物。芦丁是主要的酚类化合物芸香(464.95微克/克)，其次是丁香酸(179.74微克/克)，柚皮素(109.78微克/克)。芹菜酚类提取物也显示出良好的抗氧化活性，用DPPH和β-胡萝卜素测试的值分别为0.77 mM TE/g DW和0.37 mM β-CE/g DW。

对于抗炎活性，最高测试浓度(200 μg/mL)对白蛋白变身的抑制率为50.61 %，对膜稳定性的抑制率为44.12 %。关于抗菌效果，金黄色葡萄球菌是最青春的细菌，抑菌圈为14.37 mm，MIC值为0.625 mg/mL，其次是李斯特氏菌，以及大肠杆菌。

介绍

天然产物长期以来被认为是药物开发中生物活性物质的宝贵来源。大多数已经开发的药物都是从以前用作传统草药的植物物种中提取的。然而，科学家最近试图完全筛选植物物种，认为自然是药物发现的化学变化生物活性化学物质的无限供应。

作为化学抗氧化剂的替代品，科学家们对从植物材料中获取天然抗氧化剂越来越感兴趣。抗氧化剂是能够防止自由基及其破新性影响的分子。这些抗氧化剂的作用可能处于多个阶段,通过提供氢、减少单线态氧、充当螯合剂和通过各种方法捕获自由基。

大约有40种芸香属，地中海盆地特有的一个一年生高度芳香灌木属。该属分布最广、研究最深入的三个种芸香属是芸香长度,芸香属查勒彭斯长度，以及芸香属蒙大拿长度的叶子，有令人不快的气味，并且是小的、长方形的、分裂的、羽状的和腺状的。除了中心花有五个花瓣外，这朵花有四个花瓣。

芸香自古以来就被用作烹饪和药用草药。这种药用植物在地中海地区长期用于治疗许多炎症疾病。据报道R.格雷沃伦斯具有广谱活性，包括抗微生物、抗氧化、抗糖尿病、抗炎、镇静和解痉特性。

芸香属有超过120种来自几种天然化合物类别的物质，如生物碱、酚酸、类黄酮、香豆素、木质素、精油和呋喃喹啉。酚类化合物是强抗氧化剂，通过贡献一个电子或氢原子来中和自由基。芸香苷被公认用于改善记忆恢复，并具有药理学性质，如抗炎、抗病毒、抗过敏、抗真菌和抗病活性。

在阿尔及利亚，这种植物很普遍，在传统医学中用作退烧药、局部抗毒药、抗恶心和呕吐、便秘、疟疾、贫血、风湿病、胃痛、肠虫、难产、眼和耳疼痛、哮喘和神经官能症。值得一提的是，大多数关于该属的研究芸香属通常集中于精油、生物碱或香豆素的表征。因此，本研究旨在对阿尔及利亚的酚类化合物进行鉴定和定量芸香通过高效液相色谱-二极管阵列联用和电喷雾质谱检测探讨其抗氧化、抗炎和抗菌特性。

结果和讨论

总多酚和黄酮类化合物

天然多酚的充足供应、其低成本生产以及其最小的副作用使得它们被用作开发新的抗疾病药物的主要成分。总酚含量芸香根据古特芬格比色法测定提取物使用福林-西卡尔特试剂。结果表示为毫克没食子酸当量/克提取物，芸香提取物中多酚类物质含量较高，为41.63±0.394mg GAE/g。

格雷沃伦斯显示出良好的类黄酮含量(13.97±0.33毫克当量/克)。这些结果略高于余等人的结果，测得总酚含量为24.96±0.19毫克GAE/克，总黄酮含量为11.90±0.10毫克凯特/克。在阿斯加里安等人进行的另一项研究中，总酚和类黄酮含量的浓度提取物分别为14.1±0.47毫克GAE/克和15.8±0.19毫克铼/克干提取物。

R.格雷沃伦斯多酚的高效液相色谱-二极管阵列检测器-电喷雾质谱

酚类物质芸香使用HPLC-DAD-ESI-MS。鉴定了九种化合物，两种二羟基苯甲酸(原儿茶酸和丁香酸)、一种二羟基肉桂酸(香豆酰奎尼酸)、两种黄酮(芹菜素和白杨素)、三种黄酮醇(槲皮素3-D-半乳糖苷、芦丁和异槲皮素)和一种黄烷酮(柚皮素)。使用外部标准的校准曲线对每种已鉴定的化合物进行定量。总多酚含量为1011.18 μg/g，其中酚酸含量为302.71 μg/g，占总多酚含量的29.93 %，而黄酮类化合物含量为708.47 μg/g，占总多酚含量的70.07 %。中确定的主要化合物芸香芦丁占45.98 %，丁香酸占17.77 %，柚皮素占10.85 %。

努里等人研究了黄酮类化合物的地上部分芸香来自伊朗使用二维纸和薄层色谱。鉴定了以下黄酮类化合物，即槲皮素、山奈酚、芦丁、芹菜素、异鼠李素、白杨素、牡荆素和杨梅素。在另一项研究中，埃兰萨里等人，确定苯酚的概况和评估生物活性芸香长度的叶提取物芸香属含有四种酚酸和两种类黄酮。最丰富的酚酸是p-香豆酸和绿原酸；咖啡酸和原儿茶酸的浓度较低。此外，发现了高水平的类黄酮芸香苷和槲皮素，其中芸香苷绝对丰富。

的酚类化合物的定性组成和定量含量R.格雷沃伦斯也被梅尔尼克等人研究过，其中六种黄酮类化合物(芹菜素、芦丁、槲皮素、木犀草素、异槲皮素和金丝桃苷)、四种羟基肉桂酸(绿原酸、迷迭香酸、咖啡酸和p-香豆)进行了鉴定。在阿斯加里安等人的另一项工作中，确定咖啡酸是唯一的酚酸，此外还有五种黄酮类化合物(芦丁、槲皮素、芹菜素、柚皮素和木犀草素)。在这两篇小哥中，芸香苷被报道为最丰富的酚类化合物。

抗氧化活性

植物通常具有高含量的抗氧化分子(如类胡萝卜素、多酚、不饱和脂肪酸、维生素、酶和辅因子)，能够捕获自由基。这些化合物因其在预防性和治疗性植物疗法中的潜在用途而获得了特别的关注。食物和食物产品的降解主要是由氧化引起的。在文献中，一些分析描述了氧化还原化合物清除自由基的能力，以量化食品和生物样品的抗氧化能力。

的抗氧化活性R.格雷沃伦斯使用DPPH和β-胡萝卜素作为氧化剂。这R.格雷沃伦斯酚类提取物显示出良好的抗氧化活性，用DPPH和β-胡萝卜素测试分别为0.77±0.05mM TE/g DW和0.37±0.03mMβ-CE/g DW。这些结果高于余等报道的结果，世卫组织分析了不同药用和食用植物的抗氧化活性，包括R.格雷沃伦斯。

DPPH试验的结果为0.12±0.00毫米碲/克干重。在另一项研究中，埃尔默斯蒂里评估了选定的利比亚药用植物提取物的抗氧化和抗胆碱酯酶活性。他们报告了与我们相似的结果，DPPH值为0.704±0.007毫米TE/g DW。

芸香属抗氧化活性可能与芦丁含量高(464.95 μg/g)有关。芦丁(3，3，4，5，7-五羟基黄酮-3-鼠李糖苷)，其名称源于该植物芸香，也被称为维生素P，黄酮醇存在于植物中，如柑橘属果树水果、葡萄柚、烟草、芦笋、绿茶、果子、荞麦、浆果和芸香是一些其他来源。芸香苷是由黄酮醇苷元槲皮素和二糖鼠李糖基葡萄糖组成的糖苷。芦丁被广泛认为是一种强大的天然抗氧化剂，可以显著降低氧化应激。

各种机制已被确定负责其抗氧化作用在这两个在试管内和在活生物体内研究。首先，其化学结构已被证明能直接清除活性氧(ROS)。其次，它增强GSH合成，并且据信通过增加各种抗氧化酶如CAT和SOD的表达而显著增强细胞氧化防御机制。最后，芸香苷抑制黄嘌呤氧化酶，这与ROS的产生有关。

丁香酸(4-羟基-3，5-二甲氧基苯甲酸)也是丁香中含量最丰富的酚类化合物之一芸香属提取物(179.74微克/克)。它是没食子酸的3，5-二甲基醚衍生物，天然存在于许多水果、蔬菜和香料中，如小麦、橄榄、南瓜、葡萄、红酒、大麦、大米、黑麦、高粱、燕麦、巴西棕榈、玉米、蘑菇、甘蔗和蜂蜜。在许多体外和体内研究中，丁香酸被发现是一种有前途的天然抗氧化剂，在总当量抗氧化能力测定中具有高抑制作用，并且对β-胡萝卜素和2，2-二苯基-1-苦基肼基(DPPH)具有良好的自由基清除功效。

体外抗炎试验

炎症是由多种刺激如消息、受损细胞和有毒化合物产生的生物免疫系统反应。它经常涉及疼痛和增加的蛋白质变身、血管通透性和膜的改变。蛋白质变身是指由于施加外部应力或元素，如强酸或强碱、强无机盐、有机溶剂或热，蛋白质失去其动作和二级结构。当生物蛋白质变身时，它们失去了生物功能，这是众所周知的炎症原因。

R.格雷沃伦斯提取的抗炎活性物由两人评估在试管内白蛋白变身的抑制和HRBC膜的稳定。结果报告在中。芸香在两种试验中，提取物以剂量依赖的方式表现出良好的抗炎作用。用最低浓度的提取物(50 μg/mL)处理导致白蛋白变身的抑制率为35.77%；同时，标准品双氯芬酸的效果明显更显著，抑制率为60.63 %。当提取物的浓度增加两倍(100 μg/mL)时，抑制率略微增加到44.31 %。在提取物的最高测试浓度(200 μg/mL)下，获得了50.61 %的白蛋白变身抑制。另一方面，用标准药物双氯芬酸获得了85.79 %的抑制。

作为其防御作用的一部分，白细胞在炎症期间释放溶酶体酶，包括蛋白酶，导致更多的组织损伤和随后的炎症。细胞膜损伤使细胞更容易受到自由基诱导的脂质过氧化作用。膜蛋白可以通过调节钠离子和钾离子的转运来控制细胞的体积和含水量，而膜的破新将损害这一功能。由于红细胞膜类似于溶酶体的膜，抑制红细胞膜溶血可以提供对炎症过程的了解。细胞膜稳定可以通过推迟或限制胞质内容物的溶解和随后的释放来减少组织损伤和炎症。

膜稳定性的百分比芸香属提取物和药物标准双氯芬酸的计算浓度分别为50、100和200 μg/mL。根据结果，膜的稳定性是剂量依赖性的，并且浓度越高，保护作用越强。在最低浓度下，HRBC膜的稳定率为31.18 %芸香属提取物与更新的的百分比55.41 %相比，具有相同浓度的双氯芬酸。应用200微克/毫升的芸香属导致44.12 %的膜稳定性，这仍然不如用双氯芬酸获得的膜稳定性新的(74.78±1.73)。

许多研究报道了以下物质的抗炎活性芸香。在卢诺特和安拉贝库进行的一项研究中，摘录R.格雷沃伦斯显著减少角叉菜胶诱导的水肿。25毫克/千克的组合R.格雷沃伦斯吲哚美辛(2 mg/kg)显著减少角叉菜胶诱导的水肿。抗炎活性芸香在马菲斯和海伦的研究中进行了测试角叉菜胶诱导雄性大白鼠足跖水肿的研究。的摘录芸香对角叉菜胶诱导的大鼠足爪水肿显示出最大(90.9 %)的抑制作用。这种抑制作用高于标准药物沃维兰(72.72 %)。

一些作者报道了芦丁的抗炎作用芸香属通过抑制脂质过氧化和改善氧化应激。另一项研究表明，芸香苷可能在大肠中充当槲皮素输送系统。槲皮素的抗炎能力可能归因于其抑制TNF-α诱导的NFκB活化。

抗微生物活性

在过去的几十年中，已经进行了几项研究，这些研究集中于作为抗微生物剂的潜在天然来源的植物，所述抗微生物剂可能有效对抗多重抗性菌株，而没有副作用或对环境没有副作用。大多数开展了抗菌活性的研究芸香属是进行精油，生物碱，或其他芸香属主要是物种R.查勒彭斯.

银杏酚类提取物的抗菌活性芸香针对五种致病菌株，两种革兰氏阳性和三种革兰氏阴性菌株。根据纸片扩散法和微量稀释法分别计算抑菌圈和最小抑菌浓度。结果报告在中。

根据结果，金黄色葡萄球菌是最青春的细菌，抑菌圈为14.37 mm，MIC值为0.625 mg/mL，其次是李斯特氏菌(11.75毫米，最低抑菌浓度=1.25毫克/毫升)，以及大肠杆菌(10.25毫米，MIC=1.25毫克/毫升)。铜绿假单胞菌是最具抗性的菌株，抑菌圈为9 mm，MIC值为2.5 mg/mL。

革兰氏阴性菌通常比革兰氏阳性菌对抗菌药物更具耐药性。由磷脂和脂多糖(LPS)组成的革兰氏阴性菌外膜的独特结构起着新的的作用，因为它负责针对抗微生物剂的额外保护，而不影响维持生命所必需的物质交换。阿尔佐雷基和中原也获得了类似的结果，他们研究了R.格雷沃伦斯反对仙人掌长度单核细胞增生。

南奥里斯他们观察到，所有受试菌株对芸香提取物青春，抑制区为12-17mm，MIC值为0.66-2.64mg/mL。穆夫蒂等人研究了R.格雷沃伦斯乙醇提取物开启粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌，根据他们的发现，大肠杆菌是最青春的细菌，在浓度为100毫克/毫升时，抑菌圈为15.3毫米。

在奶油水果蛋白饼等人进行的另一项研究中，野生和栽培的甲醇和乙醇提取物R.格雷沃伦斯针对三种革兰氏阳性菌株和三种革兰氏阴性菌铜绿假单胞菌和肠炎沙门氏菌和两种真菌菌株：白色念珠菌和黑曲霉。注意到在开花季节开始时采集的野生芸香表现出最高的抗菌活性。这些MIC值比本研究中获得的值高10倍，这可能与化学成分有关，化学成分会因生长条件和环境因素而变化。

提取物的抗菌活性可能归因于中鉴定的酚类化合物R.格雷沃伦斯例如芸香苷、丁香酸、香豆素和柚皮素。多酚化合物是优良的天然抗菌剂。虽然多酚抗菌活性的确切机制尚不清楚，但有几种可能的机制。例如，多酚可能会破新细胞壁，导致离子、ATP、检查和氨基酸的泄漏。此外，它还可以通过降低促旋酶活性、影响蛋白质生物合成、阻断ATP合成、降低pH水平和影响生物膜形成来抑制DNA合成。

笔者认为：目前的研究集中在鉴定多酚的个体芸香并评估在试管内抗氧化和抗炎活性。R.格雷沃伦斯具有较高的总酚含量和黄酮含量。经HPLC-DAD-ESI-MS分析，鉴定出9种化合物，其中芦丁含量最高。DPPH和β-胡萝卜素试验表明，该酚类提取物具有显著的抗氧化活性；纸片扩散法和微量稀释法表明，该酚类提取物具有抗菌活性。此外，从最低浓度开始，获得了对白蛋白变身和膜稳定性的良好抑制。这项研究表明芸香可能被视为抗氧化剂、抗微生物剂和抗炎化合物的天然来源，部分解释了其在阿尔及利亚传统医学中的广泛用途。

参考文献：

阿尔及利亚芸香酚含量及体外抗氧化、抗炎和抗菌活性评价